Molekulyar bioloji tədqiqat metodları və onlardan istifadə

Molekulyar biologiya tədqiqat metodları müasir tibb, məhkəmə elm və biologiya mühüm rol oynayır. DNT və RNT öyrənilməsi avanslar sayəsində, şəxs və s. Turşuları, bir qarışıq istədiyiniz nuklein turşusu tanımaq, müəyyənləşdirmək icbar agent orqanizmin genomu tədqiq edə

Molekulyar-bioloji üsulları. Bu nədir?

Geri elm 70-80-ci illərində deşifr ilk idi insan genomu. Bu hadisə gen mühəndisliyi və molekulyar biologiya inkişafına təkan verdi. DNT və RNT-nin xassələrinin öyrənilməsi, bu xəstəlik diaqnozu, təhsil gen məqsədilə bu nuklein turşuları istifadə etmək üçün indi mümkündür ki, demək.

DNT və RNT-nin hazırlanması

Molekulyar biologiya diaqnostik üsulları tez-tez bu: maddi başlanğıc tələb nuklein turşusu. canlı orqanizmlərin hüceyrələri bu maddələrin seçmək üçün bir neçə yolu var. Hər onun üstünlükləri və mənfi cəhətləri var, və təmiz formada nuklein turşuları təcrid üsulu seçilməsi zaman nəzərə alınmalıdır.

Marmur ilə DNT 1. hazırlanması. üsul, spirt maddələrin qarışığı müalicə ibarətdir təmiz DNT nəticəsində precipitates. Bu metodun İşin mənfi tərəfi odur aşındırıcı maddələr, fenol və xloroform istifadə edir.

bumu DNT 2. Isolation. Burada istifadə əsas maddə - guanidine Thiocyanate (GuSCN) təşkil edir. Bu çökmə təbliğ deoxyribonucleic turşusu sonradan xüsusi bufer vasitəsilə toplana bilər olan ixtisaslaşmış substratı haqqında. Lakin GuSCN - TCP bir ingibitor, və hətta kiçik bir hissəsi nuklein turşuları ilə iş zaman vacibdir polimeraza zəncirvari reaksiya zamanı təsir edə bilər DNT təhvil olur.

çirkləri 3. Yağış. üsul özləri dehoksiribonukleinovoy turşusu və çirkləri təhvil deyil ki, molekulların əvvəlki fərqlənir. Bunu etmək üçün, ion mübadiləsi istifadə edin. əlverişsiz bütün maddələrin həll edə bilər ki.

4. Kütləvi seçim. Siz DNT molekulunun quruluşu və bəzi statistikası almaq üçün ehtiyac haqqında dəqiq məlumat üçün ehtiyac yoxdur Bu üsul hallarda istifadə olunur. səbəb tozlardan, xüsusilə Alkalies user zaman nuklein turşusu quruluşu zədələnə bilər.

tədqiqat metodları təsnifatı

tədqiqat bütün molekulyar-bioloji üsullarla üç əsas qrupa bölünür:

(Fermentlərin bir plüralizmi istifadə) 1. Amplification. diaqnostik üsulları çox mühüm rol oynayır polimeraza zəncirvari reaksiya - Bu PCR daxildir.

2. Neamplifikatsionnye. üsulları Bu qrup nüvə turşusu qarışıqları işi ilə bilavasitə bağlıdır. Nümunələr situ hibridləşdirilməsi və s, 3 növ ləkələr var

xüsusi DNT və ya RNT sonda üçün bağlar sonda molekul olan siqnal tanınması əsasında 3. üsulları. Example - melezleme sistemi hibrid Capture System həlli (HC2).

molekulyar bioloji tədqiqat metodları istifadə edilə bilər fermentləri

Bir çox molekulyar diaqnostika üsulları fermentlərin geniş istifadə edilə. Aşağıda ən tez-tez istifadə olunur:

1. məhdudiyyət ferment - zəruri hissələri DNT molekulunu "kəsmək".

2. DNT polimeraza - ikiqat telli dezoksiribonuklein turşusu molekul synthesizes.

3. Reverse transkriptaza (transkriptaza əks) - bir RNT şablondan DNT sintez etmək üçün istifadə.

4. DNT ligase - nukleotidlərin arasında phosphodiester istiqrazlar formalaşması üçün məsuliyyət daşıyır.

5. exonuclease - dezoksiribonuklein turşusu molekulunun son hissələrindən nukleotid rədd et.

PCR - DNA gücləndirilməsi əsas metodu

Polimeraza zəncirvari reaksiya (PCR) geniş müasir molekulyar biologiya istifadə olunur. bir DNT molekulu nüsxə (qüvvətləndirici molekul) bir çox əldə edə bilərsiniz ki, bu üsul.

PCR əsas funksiyaları:

- xəstəliklərin diaqnostikası;

- Gene DNA seqmentləri klonlama.

polimeraza zəncirvari reaksiya aşağıdakı elementləri tələb həyata keçirmək: ilkin DNT molekulu bir termiki DNT polimeraza (Taq ya PFU), deoxyribonucleotide fosfatlar (azot əsasları mənbələri), astar (2 primer 1 DNT molekulu) və özü apara bilər bufer sistemi bütün reaksiyalar.

denaturation, primer annealing və elongation: PCR üç mərhələdən ibarətdir.

1. denaturation. 94-95 dərəcə isti proshodit bir temperaturda DNT iki zəncir arasında hidrogen istiqrazlar qırmaq və bir nəticə kimi biz iki tək qapalı molekulları almaq.

2. tavlı astar. 50-60 dərəcə temperaturda santigrat tamamlama növünə görə tək qapalı nuklein turşusu molekullarının ucunda daxil astar baş verir.

3. Elongation. 72 dərəcə temperaturda ikiqat dezoksiribonuklein turşusu molekulları sintez qızı qapalı olunur.

DNA sequencing

Molekulyar biologiya tədqiqat metodları tez-tez deoxyribonucleic turşusu bir molekul nukleotidlərin ardıcıllığı bilik tələb edir. müəyyən etmək üçün genetik kodu ardıcıllıqla. Gələcəkdə molekulyar diaqnostika insan ardıcıllıqla müəyyən əldə bilik əsaslanır.

sequencing aşağıdakı növləri:

• Maxam-Gilbert tərəfindən sequencing;
• Sanger sequencing;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe sequencing.